کیت سنجش ناخالصی پروتئین سلول میزبان High-Five
سوالات متداول
1- چه مقدار میتوان کیت را بیرون از یخچال نگه داشت؟
حین انتقال باید زنجیرهی سرد کیت رعایت شود و توصیه میشود به محض اتمام کار کیت به یخچال (دمای 8-2 درجه سانتیگراد) منتقل شود.
2- عملکرد و پوشش‌دهی کیت ELISA برای پروتئینهای سلول میزبان (HCPs) چگونه است؟
کیت High-Five Host Cell Proteins به دلیل حساسیت بالا (با LOD حدود 8/0 نانوگرم بر میلیلیتر و LOQ حدود 3 نانوگرم بر میلیلیتر) و سرعت بالا، روشی کارآمد برای ارزیابی آلودگی‌های پروتئینهای سلول میزبان (HCPs) محسوب میشود. این روش ایمونواسی، بر اساس واکنش آنتی‌بادی‌های پلی‌کلونال با پروتئینهای سلول میزبان (HCPs) سلول حشره Trichoplusia ni (High-Five) عمل می‌کند. با توجه به ماهیت پیچیده و متنوع پروتئینهای سلول میزبان (HCPs)، برای ارزیابی جامعتر پروفایل ناخالصیها، روشهای تکمیلی (Orthogonal Methods) مانند کروماتوگرافی مایع-طیف‌سنجی جرمی (LC-MS/MS) نیز توصیه می‌شوند.
3- آیا پدیده “اثر هوک” (Hook Effect) در این کیت مشاهده میشود؟
اثر هوک پدیده ای است که در اثر بالا بودن غلظت آنتیژن هدف در نمونه منجر به کاهش سیگنال و جواب منفی کاذب میشود. کیت High-Five Host Cell Proteins برای ممانعت از این پدیده، به صورت تست دو مرحله ای طراحی شده و هیچ نشانی از اثر هوک در بررسی عملکرد آن در نمونههای تا غلظت های 780 میکروگرم بر میلیلیتر دیده نمیشود. برای نمونههایی با غلظت بسیار بالاتر از محدودهی خطی کیت، باید حداقل غلظت مورد نیاز یا MRD (Minimum Required Dilution) با استفاده از رقیقکنندهی سازگار با محصول و قابل بازیابی (recovery) استفاده شود.
4- آیا غلظت بالای محصول دارویی میتواند در نتایج تداخل ایجاد کند؟
بله، غلظتهای بالای برخی نمونهها ( بیشتر از 1 میلیگرم بر میلیلیتر)، میتواند در اندازهگیری دقیق نتایج پروتیئنهای سلول میزبان (HCPs) تداخل ایجاد کند. یک روش موثر برای رفع این مشکل رقیق کردن نمونه است. دقت بالای کیت و پایین بودن ضریب تداخل آن، قابل اعتماد بودن نتایج را نشان میدهد.
5- در صورت رقیقسازی اشتباه نمونه چه مشکلی پیش میآید؟
در نمونههای با غلظت بالای پروتئینهای سلول میزبان (HCPs) در صورتی که رقیقسازی به درستی انجام نشود، تست خطی بودن (linearity) مشاهده نمیشود. همچنین در صورت استفاده از رقیقکنندهی نامناسب، بازیابی (recovery) به درستی انجام نشده و غلظت نهایی محاسبه شده اشتباه خواهد بود.
6- آیا استفاده از کیت High-Five Host Cell Proteins به تنهایی برای کنترل پروتیئنهای سلول میزبان (HCPs) کافی است؟
کیت High-Five Host Cell Proteins با روش الایزا که حساسیت و توان عملیاتی بالایی دارد میتواند به آسانی برای مصارف صنعتی مورد استفاده قرار گیرد. استفاده از روش های دقیق مثل ایمونواسی برای سنجش پروتئینهای سلول میزبان (HCPs) از نکات مهم مورد تاکید سازمانهای نظارتی است. با این وجود، استفاده از روشهای تکمیلی مثل LC-MS/MS و 2D-PAGE/DIGE برای درک جامعتر از ماهیت ناخالصیها و اطمینان از عدم وجود پروتئینهایی که با روش الایزا شناسایی نمیشوند توصیه شده است. با این رویکرد ها میتوان خطایابی و بهینهسازی فرآیندهای پایین دستی و خالصسازی پروتئین را آسانتر، سریعتر و با اطمینان بیشتر انجام داد.